共同研究・競争的資金等の研究課題 - 山本　雅樹

学童期から思春期の子どもの小児がん医療における意思形成過程の解明と支援方法の開発

基盤研究(C)

研究期間:

2021年04月

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2024年03月

 

道信 良子, 山本 雅樹, 五十嵐 敬太

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学童期に小児がんを発症した子どもたちが、自分に対する医療や自分の身体に対してどのような過程を経て、自分の小児がん医療に対する意思を形成していくのかを明らかにするために、臨床における短い参与観察とインフォーマル・インタビューを行った。5歳から12歳までに小児がんを発症し、半年以上の入院生活を経験している子ども12人を対象とした。新型コロナウイルス感染症の予防のため、子どもと面会する時間は15分以内とし、面会が禁止されている期間はカルテからの情報を得た。面会が解除されたら、医師の回診にも付き添い、子どもと医療者とのかかわりを観察した。以上の継続的な焦点化した調査をふまえて、小児がん医療に学際的な子ども学の視点を取り入れ、小児がん医療における子どもの意思決定を支援していくための理論的枠組を検討した。それは、子どもの成長と医師の育みを視野にいれながら、子どもと周囲の人との「関係性」に着目した意思決定である。この結果は、国際小児がん学会に抄録としてまとめ、提出した。現在査読中である。方法論の検討は十分に進んでいないが、新型コロナウイルス感染症対策もふまえ、斬新な方法が必要であり、研究に参加している家族の意向をたずねている。なお、地域の参与観察( 子どもと家族が住んでいる地域での催しや行事に許可を得て参加すること)も、感染症対策の観点から遠隔での調査を現在検討している。学校における健康づくりや身体のケアに関する子どもの意思決定とその支援の現状についても、次年度に検討したい。

CCL8制御で介入した移植片対宿主病における病態解析の基礎的研究

基盤研究(C)

研究期間:

2021年04月

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2024年03月

 

五十嵐 敬太, 山本 雅樹, 赤根 祐介, 浜田 亮

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ドナーとしてC57BL/6(B6)マウス(H-2b, I-Ab)、レシピエントとしてBALB/cマウス(H-2d, I-Ad)を使用し、レシピエントマウスにドナーマウスの骨髄細胞と脾臓細胞を移植することで致死的急性移植片対宿主病(GVHD)を誘導した。 ドナーがB6-野生型(WT)でレシピエントがBALB/c-WTマウスの移植群と、ドナーがB6-CCL8ノックアウト(CCL8KO)マウスでレシピエントが同じくBALB/c-WTの移植群のアウトカムを比較した。移植後の体重減少に有意差はなく、移植後day1とday4のELISA測定による末梢血のCCL8発現も同等であった。両移植群ともに移植後day7までには全例早期死亡し、log-rank検定では生存率に差を認めなかった。 結果から、ドナーのCCL8欠損は重症GVHDを誘導する移植モデルでは生存率に影響を与えないことが示唆された。

急性移植片対宿主病の病態解析及びその分子標的療法の開発

基盤研究(C)

研究期間:

2015年04月

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2018年03月

 

山本 雅樹, 堀 司, 斉藤 淳人, 五十嵐 敬太

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野生型マウスおよびケモカインCCL8ノックアウトマウス由来細胞を用いた白血球混合培養を行ったところCCL8タンパクの低発現を確認した。またCCL8 mRNA特異的なsiRNAを用いたin vitro RNAiを行ったところ、CCL8タンパクの発現が軽度抑制された。 gradeII-IVのヒトGVHD症例31例においては、血清CCL8濃度は移植後30日以内に最高値を示す例が多く、移植後100日以内に血清CCL8タンパク濃度が213pg/mL以上となった症例では移植後非再発死亡率が高率であった。これより移植後早期のCCL8タンパクの発現は移植後の非再発死亡を予期できる因子となりうる事が示された。

急性移植片対宿主病分子マーカーCCL8の分子機能解析

若手研究(B)

研究期間:

2010年

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2011年

 

山本 雅樹

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急性移植片対宿主病(GVHD)における分子マーカーであるケモカインCCL8について検討した。GVHDマウスモデルにおいて移植後5日目の血漿中CCL8濃度は、その後の重症度や予後と相関関係を示した。ヒト検体においても血清中CCL8濃度は治療反応性を反映し、またGVHD重症度と相関する可能性が示された。

急性移植片対宿主病における分子マーカーの定量系の確立及びその機能解析

若手研究(B)

研究期間:

2008年

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2009年

 

山本 雅樹

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急性移植片対宿主病(GVHD)における分子マーカーとしてケモカインCCL8について検討した。重症度の異なるGVHDマウスモデルを作製し、血漿中のCCL8をELISA法により定量した。次に白血球混合培養を応用したin vitroでのCCL8発現系を確立し、CCL8の発現機序解析を行った。さらに蛍光免疫染色によりCCL8の発現細胞の同定を行った。またToll-like receptor(TLR)刺激のCCL8発現へ関与も検討した。

間葉系幹細胞による移植片対宿主病の予防および治療法に関する基礎的研究

基盤研究(C)

研究期間:

2006年

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2007年

 

鈴木 信寛, 畠山 直樹, 山本 雅樹, 堀 司

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生後約8週のC57BL/6マウスの脛骨および大腿骨より骨髄細胞を採取し,前日に8.5Gy照射されたBALB/cマウスの尾静脈より2x10^7細胞を注入したところ移植片対宿主病(GVHD)を発症するも長期生存することを確認した。重症GVHDマウスモデルを作成するために、C57BL/6の脾細胞を各種細胞数に調整して、骨髄細胞と同時にBALB/cマウスに注入することにより種々の重篤度のGVHDを発症するモデルを確立した。間葉系幹細胞(MSCs)のGVHDに対する予防または治療的効果を検討するために、ドナーであるC57BL/6骨髄からMurine MesencultにてMSCsを樹立した.骨髄細胞を培養し、adherentcellの継代培養を続けることにより安定したMSCs培養系が確立された。樹立したMSCsの性質を細胞表面マーカーをフローサイトメーターにて検討したところCD45-,CD11b-,Sca1+,CD44+であり、また脂肪細胞、骨芽細胞に誘導され、MSCsであることを確認した。作製した種々の重篤度を示すGVHDモデルマウスに5〜10x10^5MSCsを骨髄移植同日、骨髄移植翌日など細胞数、骨髄移植とのタイミングを種々変えて移植した。すべてのマウスは、移植後28日まで観察した。観察項目は(1)体重(2)臨床的GVHD症状スコア(3)死亡日(4)死亡した場合はGVHD主要臓器を採取し病理学的所見を観察した。さらに堀らが新たに見出したGVHDバイオマーカー候補であるCCL8の血漿濃度を定量した。CCL8血漿濃度定量に当たっては新たにマウスCCL8由来合成ペプチドを4種類作成しキャリアを結合後各3匹の家兎に免疫し、抗体化を免疫ペプチドに対する結合性で検討した。得られたポリクローナル抗体のすべての組み合わせを検討し、感度特異度がもっとも良好な組み合わせの抗体を用いてELISA(enzyme linked immunosorbent assy)を構築した。本ELISAの最小検出感度は約70pg/mLであった。このELISAにてGVHD発症マウスおよびシンジェネイク骨髄を移植したコントロールマウスでの血漿濃度を検討したところ骨髄移植後7,14,21,28日いずれの時点でもGVHDマウスモデルにおいてCCL8がコントロールマウスに比較して10倍以上検出された。しかし今回作成した重症GVHDマウスモデルでは、hyper-acute GVHDとなるため、MSCs投与のみではGVHDによる死亡率の減少、臨床症状の軽減、血漿CCL8濃度の低下などの明らかな効果は認められなかった。MSCs細胞数、投与時期、補助療法などをさらに検討する必要があることが示唆され、現在準備中である。