研究者詳細 - 菊池　真

46億年ものノウハウを蓄えている生命の基本単位である細胞や人体の研究から,知的環境を支えるリアルセンサネットワークとして,ユビキタスゼロクリックセンサネットワーク(Ubiquitous Zero-Click Sensor Network)を提案し実証実験を行ってきた.そこから情報が薬として作用していることを見いだし,「情報薬」(Info-Medicine)という新しい概念を作り出した.また,細胞生物学・情報社会科学的観点から「情報」を定義することにより,「情報薬」の可能性が更に広がった.身体はすばらしいリアルセンサネットワークそのもので,あらゆるTo-Brain Type(II型)情報薬を得て生命活動に活用している.多くの情報薬の中から取捨選択し,あるものはIn-Brain Type(III型)情報薬として作用している.これらはIn-Social Type(I型)情報薬の影響を受け,更に意識と無意識によりTo-Cellular Type(IV型),そしてIn-Cellular Type(V型)情報薬が産生され,健康を保っている.特に意識に上らない自動コントロールの破綻,あるいは,意識されても適切な対策がなされないことが病気につながる.そこで,ユビキタスゼロクリックセンサネットワークにより察知し,それを事前に防ごうとするのが,戦略的防衛医療構想(SDMCI : Strategic Defensive Medical Care Initiative)で,その強力な武器は「情報薬」である.

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健康増進への新しい展開 : 医学と情報科学の融合 : 戦略的防衛医療構想 :「情報薬」による超予防医療

辰巳治之, 新見隆彦, 太田秀造, 溝口照悟, 菊池真, 市川量一, 二宮孝文, 中村正弘

バイオメカニズム学会誌 = Journal of the Society of Biomechanisms ( バイオメカニズム学会 ) 35 ( 2 ) 113 - 119 2011年05月

戦略防衛構想(SDI : Strategic Defense Initiative) では，IT をフル利活用しミサイルが飛んで来るのを逸早く察知して，その軌道を綿密にすばやく計算し，タイミングよく空中で破壊する。このことにより積極的な攻撃は行わず，究極の防衛を実現している。このことにヒントを得て，医療系で実現しようというものが，我々の提案している戦略的防衛医療構想(SDMCI :Strategic Defensive Medica1-Care Initiative) である。超予防医療としてのこの構想は，Ver.1.0 から始まり，現在では，Ver.3.0 に達している。これらを推進し実現する為の強力な武器は「情報薬」で，IT 及び情報科学との融合が，これからの21 世紀の医療には必須のものとなる。その要素としてのゼロクリック，どこでも逆ナースコール，そして，ユビキタスセンサーネットワークの解説と、その応用例を示した。

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髄鞘形成期における初代培養ラット後根神経節細胞への組換えアデノウイルスを用いた変異MPZ cDNAの導入

菊池真, 小塚直樹, 二宮孝文

札幌医科大学保健医療学部紀要 = Bulletin of School of Health Sciences Sapporo Medical University ( 札幌医科大学保健医療学部 ) 0 ( 13 ) 13 - 20 2011年03月

Myelin Protein Zero(MPZ)遺伝子の変異はCharcot-Marie-Tooth病を引き起こす．今回，我々は，ラット後根神経節細胞由来の培養細胞に389A>G(130Lys>Arg)の点変異を有するMPZ cDNAを導入し，その形態学的観察を行った．培養後，2週間の時点で、アデノウイルスベクターを用い，野生型MPz cDNA(wild)，点変異MPZ cDNA(Mt)，LacZ cDNA(LacZ)のそれぞれを導入した．同時に，何も導入しない群(NC)も作成した．cDNA導入後，さらに2週間の培養を継続し，合計4週間の培養を行った．解析は免疫組織化学染色法と髄節長の計測，および電子顕微鏡による微細構造の観察を行った．結果，アデノウイルスベクターを用いて，培養細胞にMPZ cDNAの導入が可能であった．また，全ての群間において髄節長に違いはみられなかった．また，電子顕微鏡による観察でも違いはみられなかった．これらのことから，389A>G(130Lys>Arg)の点変異をもつMPZ遺伝子は2週間の培養では髄鞘の形態に作用しないことが考えられた．しかし，今後，髄鞘の病理学的変化がいつの時点であらわれるかについて，DRGの長期培養も含めた更なる実験が必要であると考えられた。

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Aprataxin遺伝子変異(689insT)が培養ラット後根神経節の髄鞘形成に及ぼす影響について

堀本佳誉, 菊池真, 舘延忠

札幌医科大学保健医療学部紀要 = Bulletin of School of Health Sciences Sapporo Medical University ( 札幌医科大学保健医療学部 ) 0 ( 13 ) 21 - 27 2011年03月

眼球運動失行を伴う失調症（AOA1）はaprataxin遺伝子の変異により起こる疾患である。本研究では、アデノウイルスを用いて野生型 aprataxin cDNA、689insT変異型aprataxin cDNA、LacZを発現するcDNAのそれぞれを培養ラット末梢髄鞘に導入したもの（Wild, Mt, LacZ）と導入しない培養ラット末梢髄鞘（NC）を作製・培養し、絞輪間距離の計測を行った。遺伝子導入後、Wild、Mt、LacZ、NCの4群間における絞輪間距離の比較ではNCとWildの間（P<0.O1）、LacZとWildの間（P<0.001）に有意差を認め、Mtは他の3群と有意差を認めなかった。この結果から、末梢神経細胞に対してMtの機能は優性阻害の影響はなく機能の喪失であり、Wildで起こるaprataxinの過剰な発現は、Schwann細胞の配列後に起こる伸長や、髄鞘化の開始、軸索の伸長に何らかの影響を及ぼす可能性が推測された。

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M-Like Cells of Human Adenoids in vivo and in vitro

Ken-ichi Takano, Takashi Kojima, Noriko Ogasawara, Mitsuru Go, Shin Kikuchi, Takafumi Ninomiya, Makoto Kurose, Jun-ichi Koizumi, Ryuta Kamekura, Norimasa Sawda, Tetsuo Himi

RECENT ADVANCES IN TONSILS AND MUCOSAL BARRIERS OF THE UPPER AIRWAYS ( KARGER ) 72 185 - 185 2011年

研究発表ペーパー・要旨（国際会議）

Expressions of tricellulin, claudin-19 and junctional adhesion molecule-C in myelinating mouse Schwann cells

Shin Kikuchi, Takafumi Ninomiya, Takashi Kojima, Haruyuki Tatsumi

NEUROSCIENCE RESEARCH ( ELSEVIER IRELAND LTD ) 71 E231 - E231 2011年

研究発表ペーパー・要旨（国際会議）

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Tricellulin is expressed in autotypic tight junctions of peripheral myelinating Schwann cells

Takafumi Ninomiya, Shin Kikuchi, Haruyuki Tatsumi, Takashi Kojima

NEUROSCIENCE RESEARCH ( ELSEVIER IRELAND LTD ) 68 E241 - E241 2010年

研究発表ペーパー・要旨（国際会議）

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Aprataxin遺伝子変異(689insT)が認められた眼球運動失行を伴う失調症(Ataxia-oculomotor apraxia; AOA1)患者の臨床症状

堀本佳誉, 菊池真, 大須田祐亮, 舘延忠, 小塚直樹

理学療法学 ( 公益社団法人日本理学療法士協会 ) 36 ( 6 ) 317 - 323 2009年10月

【目的】常染色体劣性遺伝性脊髄小脳変性症のひとつである眼球運動失行を伴う失調症(Ataxia-oculomotor apraxia; AOA1)はaprataxin遺伝子の変異により起こる疾患である。AOA1患者の理学療法を行う上で,小脳症状の重症度は進行初期に決定されるが,末梢神経障害は進行とともに経年的に悪化することを考慮すると,末梢神経障害の変性状態の臨床症状を知ることは重要である。【方法】慢性期のAOA1患者2名(44歳,48歳)の臨床症状を定性的,定量的評価スケールを用いて評価した。【結果】神経伝導速度が20歳代から40歳代の約15年で約20m/sの低下が認められ,運動機能の特徴として,重度の小脳失調と,特に末梢部・下肢に強い末梢神経症状が認められた。【結論】AOA1患者に対しては,小脳症状に対する理学療法のみでなく,末梢神経障害を考慮した予防的運動療法も行うことが重要になると考えられた。

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学内研究紹介シナプス構築の形成機構--小脳プルキンエ細胞を中心に

市川量一, 岩村広太, 菊池真, 新見隆彦, 二宮孝文, 辰巳治之

札幌医学雑誌 ( 札幌医科大学 ) 77 ( 1 ) 1 - 6 2008年12月

Proper synaptic organization contributes crucial role in generating proper neuronal output. This article reviews a series of experiments aimed at investigating mechanism of formation of proper synaptic organization in cerebellar Purkinje cell (PC). Maturated PC receives two types of excitatory inputs, parallel fibers (PF) and climbing fiber, in segregated dendritic domain. During developing period, PF synapses induce elongation of PC dendrites and move to the elongated portion, and CF translocates along PC dendrite after PF synapses. PF and CF compete for spine to form synaptic contact and newly formed synapse is likely to be stabilized if it is to be proper. Furthermore, occupation of spines by PF synapses prevents from multiply CF innervation on PC dendrites. At adult, CF acts to maintain completed synaptic organization. In addition, the molecular that involve in the stabilization of excitatory synapses on PC have been reported.

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1567 眼球運動失行を伴う失調症患者(689insT)の臨床症状(神経系理学療法,一般演題(ポスター発表演題),第43回日本理学療法学術大会)

堀本佳誉, 菊池真, 中塚直樹, 舘延忠

理学療法学 ( 公益社団法人日本理学療法士協会 ) 35 ( 2 ) B1567 - B1567 2008年04月

【諸言】常染色体劣性遺伝性脊髄小脳変性症のひとつである、眼球運動失行を伴う失調症（AOA1）はaprataxin遺伝子の変異により起こる疾患である。この遺伝子の翻訳するタンパクは一本鎖遺伝子損傷修復機能を有することが確認されている。疾患の発症時期は10歳以前であり、発症早期より失調症状が認められ、その後、疾患の進行とともに末梢神経障害が著明となる。成人期AOA1患者の小脳症状と末梢神経障害の臨床症状を知ることは、予後を予測した理学療法を行うために重要である。また、一過性の過負荷の運動は遺伝子やタンパクの損傷を引き起こし、逆に規則的で適度な運動は損傷を一定に保つか減少させることが知られており、AOA1患者の臨床症状における遺伝子損傷レベルを知ることは適切な運動量・強度の処方の上で重要な指標となる。
【方法】対象はAOA1患者（689insT）の姉妹（44歳、48歳）であった。末梢神経症状の量的評価として運動神経伝導速度の計測を行った。対象神経は、上肢は尺骨神経、下肢は腓骨神経とした。重症度は厚生省運動失調調査研究班によるSCDの重症度分類、小脳症状はInternational Cooperative Ataxia Rating Scale、末梢神経症状はNeuropathy Disability Score、筋力評価はMedical Research Council sum score（MRCS）を用い、質的評価を行った。遺伝子損傷レベルの測定は平常時の尿中8-ヒドロキシデオキシグアノシン（以下8-OHdG）濃度測定を行い、40代女性10名（43.3±2.1歳；41～46歳）を対照群とした。各被検者に対し、本研究の説明を行い、書面にて同意を得た。
【結果】神経伝導速度は、尺骨神経では21.2m/s、20.5 m/s、腓骨神経では計測不能で、尺骨神経では20歳代から40歳代の約15年で20m/s程度の低下が認められた。質的評価により、重度の小脳失調と、特に末梢部・下肢に強い筋力低下が認められることが明らかとなった。尿中8-OHdGでは、対照群は3.7±1.2ng/mg、AOA1患者はそれぞれ4.0ng/mg、7.3ng/mgであり、対照群との差は認められなかった。
【考察】成人期AOA1患者の臨床症状の評価により、より早期に小脳症状に対する理学療法のみでなく、末梢神経障害を考慮した身体局所の選択的筋力強化、関節変形・拘縮の予防的運動療法などの理学療法を行うことが重要になると考えられた。平常時の尿中8-OHdGは対照群との差が認められなかったが、過負荷な運動はAOA1患者の病状の進行を助長してしまう可能性があることを考慮すると、今後、理学療法前後の尿中8-OHdGの測定を行う必要があると考える。

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戦略的防衛医療構想の実現を目指して

辰巳治之, 新見隆彦, 中村正弘, 太田秀造, 菊池真, 市川量一, 二宮孝文, 明石浩史, 石田朗

臨床スポーツ医学 = The journal of clinical sports medicine ( 文光堂 ) 25 ( 2 ) 109 - 118 2008年02月

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先天性筋強直性ジストロフィー症患者における4年間の握力変化

菊池真, 小塚直樹, 内田英二, 二宮孝文, 辰巳治之, 武田秀勝, 舘延忠

Journal of the Japanese Physical Therapy Association 11 ( 1 ) 23 - 27 2008年

Myotonic dystrophy (MyD) is a neuromuscular disease that is autosomal dominant and the most common form of muscular dystrophy affecting adults. The clinical features of MyD include a multisystemic disorder characterized by myotonia, progressive muscle weakness and wasting, cataracts, premature balding and mental retardation. The most severe type of MyD is classified as congenital MyD (CMyD). The muscle weakness in CMyD is very severe, but muscle development can be observed in the period of growth. However, no clinical case of this type has been reported yet. Therefore, we report on a girl with CMyD who had an increase in muscle strength over a four-year period. The girl with CMyD participated in this study from the age of 9 to the age of 12. The measurement of muscle strength was recorded as the maximum score of grip strength with the use of dynamometers. Grip strength was assessed once a year by the same two physical therapists. Grip strength of CMyD for each year was markedly weak when compared with the normal controls, but muscle strength changed within some specific growth areas. The muscle weakness in CMyD was remarkable, but the result showed that specific muscle strength of CMyD in childhood was actually increased.

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筋ジストロフィー症の運動療法

小塚直樹, 中村宅雄, 舘延忠, 菊池真

運動療法と物理療法 = The Journal of physical medicine 18 ( 1 ) 8 - 15 2007年06月

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The appearance of aprataxin in rat cultured neuron and glia

Takafumi Ninomiya, Shin Kikuchi, Ryoichi Ichikawa, Naoki Kozuka, Nobutada Tachi, Haruyuki Tatsumi

NEUROSCIENCE RESEARCH ( ELSEVIER IRELAND LTD ) 58 S139 - S139 2007年

研究発表ペーパー・要旨（国際会議）

側臥位が非対称性変形の改善に及ぼす影響

堀本佳誉, 高田千春, 樋室伸顕, 市川明日香, 中村裕二, 小塚直樹, 竹内孝子, 諸星輝明, 千葉峻三, 菊池真

日本重症心身障害学会誌 ( 日本重症心身障害学会 ) 31 ( 3 ) 279 - 282 2006年12月

重症心身障害児・者(以下、重症児(者))の呈する非対称変形に対して、その進行の予防、改善のために側臥位でのポジショニングの指導を行うが、定量的な効果の検討は行われていない。本研究では、Windswept deformity(以下WD)を呈する重症児(者)12名に対して、凹側上と凸側上の側臥位の効果を定量的に比較、検討した。WDの定量的評価として、左右の下肢・骨盤間角度の差から得られるGoldsmith Indexの計測(以下GI)を用いた。側臥位実施時間は60分とし、実施前後にGIを計測し、変化値(変化値=実施前GI-実施後GI)を求めた。すべての被験者は凸側上において非対称性の改善が認められた。凹側上に関しては2名のみに改善が認められた。2名において凹側上で非対称変形の改善が若干大きかったが、10名は凸側上で改善が大きく、凸側上の側臥位が非対称変形の改善に有利であることが示唆された。(著者抄録)

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212 尖足に対して整形外科的治療を受けた先天性筋強直性ジストロフィー症児の理学療法経過報告(神経系理学療法16,一般演題ポスター発表,理学療法の可能性,第41回日本理学療法学術大会)

齋藤大地, 小塚直樹, 鳥井智太郎, 井上和広, 三島令子, 内田雅之, 菊池真

理学療法学 ( 公益社団法人日本理学療法士協会 ) 33 ( 2 ) 106 - 106 2006年04月

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尖足に対して整形外科的治療を受けた先天性筋強直性ジストロフィー症児の理学療法経過報告

齋藤大地, 小塚直樹, 鳥井智太郎, 井上和広, 三島令子, 内田雅之, 菊池真

日本理学療法学術大会 ( 公益社団法人日本理学療法士協会 ) 2005 ( 0 ) B0212 - B0212 2006年

【はじめに】 先天性筋強直性ジストロフィー症（congenital myotonic dystrophy;以下CDM）は常染色体優性遺伝疾患で、生下時のリスクと尖足もしばしば指摘される。しかし、新生児期を乗り越えた後は、緩やかに運動発達し歩行を獲得する症例が多い。そのため足部に対しての治療は重要となってくる。今回、足部変形が運動発達を阻害していた為、手術が施行されたCDM児2例の理学療法経過を報告する。 【症例1】 39週5日3270gで出生、男児。母親は成人型筋強直性ジストロフィー（myotonic dystrophy;以下DM）を発症。生下時より両側内反尖足を認めていたが、全身状態不良にて殆ど未治療。生後8ヶ月よりPT介入を開始、運動発達は進み掴まり立ちを意欲的に行うも、変形は進行し足関節背屈角度は右-30°左-60°、足背接地する様になる。2歳6ヶ月で、足関節周囲筋解離術を施行、術後療法の後3歳で独歩獲得。その後、足部背屈角度は、右30°左25°迄拡大しているが、外反扁平足を呈する。その後走行、ジャンプも可能となる。 【症例2】 31週1866gで出生、男児。母親はDMを発症。呼吸窮迫症候群により74日間人工換気。生後8か月 PT介入を開始、足背屈角度は右15°左30°であった。4歳で独歩獲得するも、右足部は外反尖足に移行し、右足背屈角度は-30°で踵接地不能、膝反張して歩行。4才9ヶ月時に、右足関節周囲筋解離術を施行した。術後療法の後、右足背屈角度は5°、装具装着で歩容の改善を見る。 【考察】 CDM児の足部変形においては、早期の装具・徒手的アプローチは有効とされるが、生下時リスクにより介入が遅れた場合、変形は進行していく。今回一側足部と両足部の違いはあったが、機能的なアライメントの獲得に向けて最小限の筋解離術及び術後療法へと転換し、良好な経過が得られた。いかなる場合でも、介入開始からの可動域管理と体幹機能を含む粗大運動全般の発達支援の継続は必須である。 2症例とも、発達指標の時期については類似が見られ、手術の時期に関わらず独歩を獲得した。しかし、手術時期が遅い例の方が、早い例に比べ、約1年の遅れが見られた。運動発達は独歩を目標として積極的に行い、足部の状態に応じて手術も選択肢に入れ適宜方向修正していくことが望ましい。 CDMは、第19染色体長腕にある3塩基対反復配列数が増加しており、これに発症年齢・重症度は関連するとされている。親から子に伝わった場合のリピート数が増加する（anticipation効果）傾向にあり、本2症例も母親はDM患者である。母親の症状の程度によっては、養育環境での運動発達支援が非常に大変になる事があるので、家族状況を含めて、身体・精神面両方に考慮したアプローチが重要になると考える。

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Acid sensing ion channel 2 (ASIC2) in rat central nervous system: The distributions and ultrastructure of ASIC2-expressing cells in the developmental stages

Takafumi Ninomiya, Shin Kikuchi, Tomoyuld Kawamata, Ryoui Ichikawa, Haruyuki Tatsumi

NEUROSCIENCE RESEARCH ( ELSEVIER IRELAND LTD ) 55 S140 - S140 2006年

研究発表ペーパー・要旨（国際会議）

重症心身障害児(者)の呈する非対称性変形の計測法 : Goldsmith 法による評価の信頼性

堀本佳誉, 高田千春, 樋室伸顕, 市川明日香, 中村裕二, 小塚直樹, 竹内孝子, 諸星輝明, 千葉峻三, 菊池真, 佐藤拓也, 佐々木智教, 佐々木悠子

日本重症心身障害学会誌 ( 日本重症心身障害学会 ) 30 ( 3 ) 287 - 290 2005年12月

本研究ではGoldsmithの考案した,非対称変形の定量的計測法(Goldsmith法;G法)の検者内,検者間,再テスト信頼性を,級内相関係数(ICC)を用いて検討し,この方法が重症児(者)の呈する非対称性変形を計測する評価方法として有用であるかどうかを検討した.非対称性の定量的評価のために,G法の中の,左右の下肢・骨盤間角度の差から得られるGoldsmith Indexの計測(GI)を4人の検者が15人の被検者に対して行った.結果は,検者内信頼性のICC(1,1)は0.981〜0.986,標準誤差は3.7°〜4.3°であった.検者間信頼性のICC(2,1)は0.996,標準誤差は3.4°であった.再テスト信頼性のICC(2,1)は0.991〜0.995,標準誤差は2.9°〜3.9°であった.よってG法は信頼性の高い評価法であり,重症児(者)の変形は複数の施設においても長期的に継続して評価する必要があるので,信頼性のある評価法であるG法を用いるのが望ましいと思われた(著者抄録)

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ホルマリン固定組織からのDNA抽出法とPCR法による遺伝子解析

菊池真, 舘延忠, 小塚直樹, 二宮孝文, 小林正裕, 堀本佳誉, 内田英二, 佐々木公男, 辰巳治之, 武田秀勝

札幌医学雑誌 ( 札幌医科大学 ) 74 ( 3 ) 39 - 44 2005年08月

Formalin is a main fixative in the field of pathology. Molecular biological analysis of formalin-fixed samples was difficult because formalin fixation decreased the quality of isolated DNA. Therefore, we compared the quality of DNA obtained by using DNA extraction kit (Sepa GeneR) to that using proteinase K. Using proteinase K, it was possible to extract high quality DNA, and obtain DNA from samples of 3 months fixative. Moreover, by proteinase K method, it was also possible to analyze aprataxin gene exon 5 in DNA extraction from formalin-fixed human brain tissues from a suspected case of early-onset ataxia with ocular motor apraxia and hypoalbuminemia (EAOH). The aprataxin gene exon 5 DNA sequences were obtained following in vitro gene amplification using nested-PCR. Mutation on aprataxin gene exon5 was not observed in the suspected case of EAOH; however, it was possible to perform sequence analysis of aprataxin gene exon5. This method was more useful for DNA extraction and direct sequencing of formalin-fixation samples than the kit method.

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261 脳炎発症後の急性期理学療法(神経系理学療法4)

小塚直樹, 澤田篤史, 舘延忠, 菊池真, 堀本佳誉, 横串算敏

理学療法学 ( 公益社団法人日本理学療法士協会 ) 32 ( 2 ) 131 - 131 2005年04月

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421 廃用性萎縮筋の引っ張り特性と組織学的特性 : ラットによる後肢懸垂モデルと後肢懸垂に関節固定を組み合わせたモデルを用いて(理学療法基礎系2)

高氏修平, 菊池真, 青木光広, 乾公美

理学療法学 ( 公益社団法人日本理学療法士協会 ) 32 ( 2 ) 211 - 211 2005年04月

CiNii

A new mutation of IGHMBP2 gene in spinal muscular atrophy with respiratory distress type 1

N Tachi, S Kikuchi, N Kozuka, A Nogami

PEDIATRIC NEUROLOGY ( ELSEVIER SCIENCE INC ) 32 ( 4 ) 288 - 290 2005年04月

This report presents a new mutation in the first Japanese female infant with spinal muscular atrophy with respiratory distress type 1. She manifested the characteristic clinical features, including early-onset respiratory failure due to diaphragmatic paralysis and severe distal muscle weakness. Muscle biopsy in the femoral muscle indicated massive neurogenic changes. Sural nerve biopsy disclosed a moderate reduction of myelinated fibers, predominantly reduced large fibers. She had a novel homozygous missense mutation 2685 C -> A, leading to a T879K substitution in the immunoglobulin mu-binding protein 2 gene. Both parents were heterozygous for this mutation. (c) 2005 by Elsevier Inc. All rights reserved.

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先天性筋強直性ジストロフィー症における3塩基反復配列(CTGリピート)数と筋組織所見の関係

菊池真, 小塚直樹, 舘延忠

総合リハビリテ-ション ( 医学書院 ) 33 ( 2 ) 167 - 173 2005年02月

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X染色体劣性遺伝ミオチューブラーミオパチーの遺伝子解析

内田英二, 舘延忠, 小塚直樹, 菊池真, 仙石泰仁, 武田秀勝

札幌医科大学保健医療学部紀要 ( 札幌医科大学 ) 6 ( 6 ) 49 - 58 2003年03月

The purposes of this study are to establish the effective and efficient screening protocol identifying the gene mutation, and to clarify the relationship between genotype and phenotype of Xlinked myotubular myopathy (XLMTM) using the molecular genetic method. Five male patients in five families with XLMTM based on clinical features and muscle biopsy were analyzed according to the screening protocol. Three types of abnormal band were identified by SSCP and HD analysis using genomic DNA from patients. In the direct sequence analysis, two frameshift mutations in exon 4 and 10 and one nonsense mutation in exon 3 were found. Frameshift mutation in exon 10 was a novel mutation. RT-PCR method was performed to the other patients who showed no abnormal bands by SSCP and HD. In the direct sequence analysis, one missense mutation was found in exon 9. This mutation was a novel mutation. The relationship between phenotype and genotype was not clarified. The screening protocol employed in this study detected the three mutations in genomic DNA and the one mutation in cDNA. The patient whom the mutation was not found was supposed to have the mutation in non-coding region of MTM1 gene. Present protocol is considered to be suitable to detect the mutations in XLMTM. 本研究は遺伝性筋疾患であるX-linked myotubular myopathy（XLMTM）における遺伝子解析において、遺伝子変異を検出する効果的かつ効率的なスクリーニング方法を規定すること、および本疾患の表現型と遺伝子型の関連を明らかにすることを目的とした。対象は臨床症状および筋生検によって重症のXLMTMと診断された５家系５名の男児とし、スクリーニングプロトコルにしたがって解析を行った。その結果、ゲノムDNAを用いたSSCPおよびHD解析において５名の患者のうち、３名について泳動変異を検出した。これらの直接塩基配列決定の結果、２名のフレームシフト変異（エクソン４および10）と１名のナンセンス変異（エクソン３）が確認された。エクソン10におけるフレームシフト変異はこれまで報告例のない新しい変異であった。ゲノムDNAを用いたスクリーニングで泳動変異が観察されなかった２名の患者に対してはRT?PCR法を用いたcDNAの直接塩基配列決定を行った。その結果、１名のミスセンス変異（エクソン９）を同定し、これまで報告例のない新しい変異であることを確認した。残り１名については変異が確認できなかった。表現型と遺伝子型の関係については、すべての患者が重症例であったこと、症例数が少なかったことから明らかにできなかった。本研究ではゲノムDNAで３名、cDNAで１名の遺伝子変異を確認したが、変異を確認できなかった患者は非翻訳領域に変異が存在する可能性が考えられた。これらの結果から、本研究で実施したスクリーニングプロトコルはXLMTMにおける遺伝子変異検出に対し十分適切であることが考えられる。

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父親由来小児筋強直性ジストロフィー症に関する研究

菊池真, 小塚直樹, 内田英二, 仙石泰仁, 堀本佳誉, 大屋一博, 武田秀勝, 舘延忠

札幌医科大学保健医療学部紀要 ( 札幌医科大学 ) ( 6 ) 43 - 48 2003年03月

筋強直性ジストロトロフィー症（DM）は成人発症筋ジストロフィーの中で最も多い疾患であり、19q13.3に存在するCTGリピートが異常増大することによって発症する。DMが全身多臓器疾患であり、様々な臨床症状がみられる。最も重篤なタイプは先天型DM（CDM）である。CDMは患者である母親から遺伝することがほとんどである。しかし、父親由来CDMの報告もみられ、臨床症状とCTGリピートの増大に父親由来または母親由来の影響についても報告されている。そこで、我々は父親由来CDMの５家系と母親由来CDMの２家系を対象に臨床症状とCTGリピート数の比較を行なった。CTGリピート数の決定にはnon RI-PCRサザンブロット法を用い、臨床症状については13項目について調査した。親の相違によりCTGリピートと臨床症状に違いはみられなかった。また、父親由来CDMは母親由来CDMと比較して、CTGリピートが小さく、臨床症状も軽度であった。保因者が母親であった場合、子宮内あるいは他の母親由来の因子がDMの子に影響しているものと思われる。Myotonic Dystrophy (DM), the most common muscular atrophy in adult, is caused by abnormal expansion CTG repeats in 19q13.3. DM is a multisystemic disorder with a high phenotypic variability. The most severe type of DM is Congenital DM (CDM). CDM is transmitted from the affected mother. However, some cases of paternally transmitted CDM have been reported. The intergenerational increase in severity is influenced by the sex. Here, we compared five paternal CDM families with two maternal DM families in terms of the clinical symptoms and the size of CTG repeat expansion. The detection of the number of CTG repeats was performed by non RI-PCR Southern blot hybridization. The clinical features of 13 items were discussed. There was no difference in CTG repeat length and clinical features between the fathers and mothers. Paternal CDM resulted in shorter CTG repeat length and lighter severity of the clinical symptoms in the affected offspring than maternal CDM. When the carrier was the mother, intrauterine or other maternal factors might have been involved in the transmission of the DM.

DOI CiNii

筋強直性ジストロフィー症CTGリピートの Non-RI PCR サザン法による解析

小塚直樹, 舘延忠, 大屋一博, 内田英二, 菊池真, 仙石泰仁

脳と発達 35 ( 5 ) 380 - 387 2003年

Myotonic dystrophy (MyD) is a hereditary neuromuscular disorder of an autosomal dominant trait. MyD is caused by an expansion of unstable CTG trinucleotide repeat in the 3′ untranslated region of mRNA coding myotonin protein kinase (MT-PK). We analyzed CTG repeat expansion in 10 patients with congenital MyD and their relatives using the non-radioactive PCR Southern method. The region containing the CTG repeat was amplified by PCR using specific primers. The PCR products were electrophoresed on a 1% agarose gel and transferred to a nylon membrane. The CTG repeat expansion was shown using a fluorescein-labelled (CTG) 10 probe. To estimate the number of CTG repeats, we compared the smears obtained on Southern blotting with a picture of PCR products and a DNA size marker (100 bp). We compared our results of radioactive Southern blotting for genomic DNA digested by Eco RI or Bgl I and for PCR products. In congenital MyD patients, heterogeneous smears (3.89-10.22kb: about 1252-3362 CTG repeat) were observed, whereas in the adult type MyD had heterogeneous smears (0.92-1.82kb: about 262-562 CTG repeat). In asymptomatic MyD patients, there were heterogeneous smears (0.35-1.16kb: about 72-342 CTG repeat). These results demonstrated anticipation. We conclude that the non-radioactive PCR Southern method is useful and convenient for the DNA diagnosis of MyD.

DOI PubMed CiNii

Non-radioactive PCR southern method for analysis of CTG repeat in myotonic dystrophy

Naoki Kozuka, Nobutada Tachi, Kazuhiro Ohya, Eiji Uchida, Shin Kikuchi, Yasuhito Sengoku

No To Hattatsu 35 ( 5 ) 380 - 387 2003年

DOI PubMed

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