共同研究・競争的資金等の研究課題 - 畠中　正光

消火器癌における免疫関連接着因子(B7-1,2)の発現と増強に関する基礎的研究

基盤研究(C)

研究期間:

1996年

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1997年

 

原口 勝, 畠中 正光, 山懸 基維, 馬場 欽也

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免疫関連接着因子であるB7-1,B7-2,の発現は、T細胞による初期抗原認識応答に必要であると考えられているが、今回我々は種々の消火器癌細胞株を用いてその発現の検索と、その発現のサイトカインによる修飾を検討した。18種の消火器癌細胞株(食道癌6種、胃癌8種、大腸癌4種)を対象とし,RT-PCR法によるB7-1,B7-2mRNAの発現およびFlowcytometry法によるB7-1,B7-2細胞表面抗原の発現を検索した。B7-1mRNAの発現は18種全種に、B7-2mRNAの発現は17種(94%)に認めた。細胞表面抗原の発現は10%以上を陽性とすると、B7-1発現陽性は72%(13/18)、B7-2発現陽性は67%(12/18)の癌細胞株に認められた。さらに、腫瘍細胞のB7-1,B7-2細胞表面抗原発現の修飾を検討する目的で、B7-1,B7-2細胞表面抗原陰性のKATO-III(胃癌細胞株)、COLO205(大腸癌)に10種類のサイトカインの存在下でその発現の変化を検索した。KATO-IIIでIL-2,IFN-α,IFN-γによってB71-,B7-2の発現増強が認められた。またCOLO205では、IL-2,IL-6,TNF-α,GM-CSF,IFN-α,IFN-γでB7-1の発現増強が、またIL-2,TNF-α,IFN-α,IFN-γ,でB7-2の発現増強が認められ、その中でも特にIL-2とIFN-γの増強作用が強かった。さらに、9種類の細胞株でIFN-γの存在下の培養でIL-10を添加したところ、B7-1,B7-2の発現増強が抑制された。今回の研究から消火器癌細胞でのB7-1,B7-2の発現が認められ、その発現がサイトカインによって修飾を受けることが明らかになり、消火器癌の免疫学的治療への応用が期待される。

腎放射線晩発障害の早期予知法の開発

基盤研究(C)

研究期間:

1996年

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1997年

 

大塚 誠, 畠中 正光

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1.早期指標としてのDNA合成促進のフローサイトメトリー法による測定 DNA合成をフローサイトメトリー法で測定を行った。腎組織を機械的に分散した後、トリプシン処理により細胞を完全に分離して、フローサイトメトリー用試料を作成した。細胞の分離はほぼ良好であった。しかし、照射一週間後の試料ではDNA合成促進の兆候はみられず、早期指標として有望ではないようであった。 2.遺伝子発現法の開発 腎放射線晩発障害の早期指標としてのDNA合成促進をさらにそれに先立つc-myc、c-H-ras、c-K-rasなどの増殖関連遺伝子の発現として捉えうるか否かを検討した。マウスの左腎に9、12、および15Gyの一回照射をそれぞれ10匹ずつ行い、照射24時間後に摘出した腎からRNAを抽出して、非照射の右腎を対照としてc-mycのmRNAレベルでの発現を解析した。 非照射マウスでは10個体中1個体に、9Gy照射マウスでは10個体中1個体に、12Gy照射マウスでは10個体中6個体に、また15Gy照射マウスでは10個体中9個体に左腎(照射腎)におけるc-mycのmRNAの発現増加がみられた。この線量と発現率との関係は以前に観察した12ヶ月後の腎重量の減少とよい相関がみられた。 この遺伝子発現法は生検標本で検索可能で、また照射24時間後の超早期に発現しており、腎晩発障害の早期指標として臨床応用が有望である。腎重量の観察との比較でも、c-mycのmRNA発現頻度の増加は腎重量の減少に一致してみられており、腎晩発障害の超早期予知法としての期待が高まる。今後はc-mycの発現した固体がのちに腎晩発障害をきたすことを確認する実験を計画している。またc-myc以外の増殖関連遺伝子についてもそれらの発現を検討し、より感度と特異性の高い早期指標の開発を目指している。

骨格筋筋線維分化と緩和時間との関係の解明

奨励研究(A)

研究期間:

1996年

　

　

 

畠中 正光

担当区分： 研究代表者

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実験動物はウサギを用い、ペントバルビタールにて麻酔下に実験を行った。MRI装置はGE社製Signa Advantage 1.5Tを用い、Extremity coilを使用した。目的とする筋肉の位置決め後、T1緩和時間の計測にはInversion Recovery系列を、T2緩和時間の計測にはSpin Echo系列を用いた。Inversion Recovery系列ではT1時間を6種類、Spin Echo系列ではTE時間を6種類変化させて得られたdata pointsからNon linear regressionによってパラメーターの推定を行いT1,T2緩和時間を計算した。slow twitch muscleとしては、soleusを、fast twitch muscleとしてはgastrocnemiusおよびextensor digitorum longusを選定した。T2緩和時間に関してはslow twitch muscleの値の方が大きいとの結果が出ているが、実験数が十分でなく結論には至っていない。今後実験数を増やしより正確に評価していく予定である。緩和時間の差の原因に関しては、slow twitch muscleでは筋小胞体構造が発達し細胞外液の割合が高いためとする意見(Polak.J.F.Investigative Radiology)があるが、この説が正しいとするT1,T2緩和時間ともにslow twitch muscleの値の方が大きくなると考えらえ、研究結果と矛盾し説明することはできない。原因に関しては、血流、筋小胞体構造、収縮関連蛋白アイソホーム等との関連について現在研究を進めている。

Diagnostic radiology using MRI

研究期間:

1995年

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2002年

 

MR画像から計算したconductivity値に基づく直腸がん悪性度評価方法確立